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手朮室無菌操作的關鍵作用在於減少手朮感染，而影響切口癒合等安全因素較多，如空氣環境、接觸性污染等，接觸性污染主要在敷料、手朮器械、縫合材料、醫護人員皮膚接觸等，因此，相關操作的無菌化管理則直接影響手朮感染的管理效果。那麼在進行手朮時，該怎麼怎麼進行無菌操作呢？
1.手朮進行中，所有工作人員均要嚴格執行無菌技術操作。洗手護士不得從朮者背後傳遞器材；巡迴護士不可用手越過無菌台傳遞物品；手朮器械的放置不能超過無菌車欄杆。
2.手朮人員有必要調換位置時，應稍離開手朮台，背對背地進行交換，並注意不得污染手臂及無菌區域。
3.凡已打開放在無菌臺上的備用物品，不論使用與否，均不得再放回無菌容器里，必須重新滅菌后才能使用。
4.切口邊緣應以大紗布墊或手朮巾（洞巾）遮蓋，並用巾鉗或縫合線固定，僅暴露手朮切口， 使用手朮薄膜保護切口。
5.切開空腔臟器前，要先用紗布墊保護週圍組織，以防止或減少污染，用手朮薄膜保護切口。
6.手朮中用過的器材要及時擦淨血跡（可以用擦手紙），以減少細菌污染及增殖。接觸過腫瘤及胃腸腔的刀剪等器械，應視為已遭污染，必須與其他器械分開，單獨放置和處理。
7.手朮開始后通向室外的正門不再開啟。手朮間的人員應避免不必要的活動，參觀手朮人員要與手朮區保持30-40cm以上的距離。
8.給手朮者擦汗時，朮者的頭部應轉向側面並用濕毛巾擦拭；手朮間內不得做與本次手朮無關的任何活動，如疊單、作敷料等。
9.為縮短手朮時間，手朮器械和用具應使朮者得心應手。
10.朮后需置引流管的病人，引流管的位置 從離切口較遠的體壁引出。
11.朮畢縫合切口前，應先用消毒液塗擦切口兩側的皮膚；縫合時須將組織準確地對合，避免遺留死腔，縫線不宜過緊過密。縫合后，再一次用消毒液塗擦切口兩側的皮膚；然後用無菌紗布覆蓋、包裹或用手朮敷料貼敷蓋。